347 χημική σύνθεση από ανοξείδωτο χάλυβα Το μέγεθος του φλεβικού ή τριχοειδούς αίματος, ειδικά για τις αποκρίσεις των Τ-κυττάρων SARS-CoV-2, καθορίζει την ανοσία στον COVID-19.

Σας ευχαριστούμε που επισκεφτήκατε το Nature.com.Χρησιμοποιείτε μια έκδοση προγράμματος περιήγησης με περιορισμένη υποστήριξη CSS.Για την καλύτερη δυνατή εμπειρία, σας συνιστούμε να χρησιμοποιήσετε ένα ενημερωμένο πρόγραμμα περιήγησης (ή να απενεργοποιήσετε τη λειτουργία συμβατότητας στον Internet Explorer).Επιπλέον, για να διασφαλίσουμε τη συνεχή υποστήριξη, εμφανίζουμε τον ιστότοπο χωρίς στυλ και JavaScript.
Ρυθμιστικά που εμφανίζουν τρία άρθρα ανά διαφάνεια.Χρησιμοποιήστε τα κουμπιά πίσω και επόμενο για να μετακινηθείτε στις διαφάνειες ή τα κουμπιά του ελεγκτή ολίσθησης στο τέλος για να μετακινηθείτε σε κάθε διαφάνεια.

347 χημική σύνθεση από ανοξείδωτο χάλυβα

Χημική σύνθεση σωλήνων από ανοξείδωτο χάλυβα 347

Η χημική σύνθεση και οι μηχανικές ιδιότητες του σωλήνα πηνίου 347 από ανοξείδωτο χάλυβα είναι οι εξής:
- Άνθρακα – 0,030% μέγ
- Χρώμιο – 17-19%
- Νικέλιο - 8-10,5%
- Μαγγάνιο – 1% max

Μηχανικές ιδιότητες σωλήνα πηνίου από ανοξείδωτο χάλυβα 347

Σύμφωνα με τον κατασκευαστή σωλήνων πηνίου 347 από ανοξείδωτο χάλυβα, οι μηχανικές ιδιότητες του σωλήνα πηνίου 347:
- Αντοχή εφελκυσμού (psi) – 75.000 min
- Αντοχή διαρροής (psi) – 30.000 λεπτά
- Επιμήκυνση (% σε 2″) – 25% ελάχ
- Σκληρότητα Brinell (BHN) – 170 μέγ

Εφαρμογές & Χρήσεις Ανοξείδωτου Σωληνίσκου 347

• Σωλήνας πηνίου από ανοξείδωτο χάλυβα 347 που χρησιμοποιείται σε ζαχαρόμυλους.
• Σωλήνας πηνίου από ανοξείδωτο χάλυβα 347 που χρησιμοποιείται στο λίπασμα.
• Σωλήνας πηνίου από ανοξείδωτο χάλυβα 347 που χρησιμοποιείται στη βιομηχανία.
• Σωλήνας πηνίου από ανοξείδωτο χάλυβα 347 που χρησιμοποιείται σε σταθμούς ηλεκτροπαραγωγής.
• Σωλήνας από ανοξείδωτο χάλυβα 347 που χρησιμοποιείται σε τρόφιμα και γαλακτοκομικά προϊόντα.
• Σωλήνας πηνίου από ανοξείδωτο χάλυβα 347 που χρησιμοποιείται σε εγκαταστάσεις πετρελαίου και αερίου.
• Κατασκευαστής σωλήνων πηνίου από ανοξείδωτο χάλυβα 347 που χρησιμοποιείται στη Ναυπηγική Βιομηχανία.

Τα ειδικά Τ-λεμφοκύτταρα του SARS-CoV-2 πιστεύεται ότι προστατεύουν από τη μόλυνση και την εξέλιξη του COVID-19, αλλά δεν υπάρχουν άμεσες ενδείξεις για αυτό.Εδώ, συγκρίναμε μετρήσεις ολικού αίματος των θετικών Τ-λεμφοκυττάρων-γ για τον SARS-CoV-2 με θετικά αποτελέσματα διαγνωστικών τεστ COVID-19 (PCR ή/και πλευρική ροή) εντός 6 μηνών από την αιμοληψία του Lian.Μεταξύ 148 συμμετεχόντων που έδωσαν δείγματα φλεβικού αίματος, το μέγεθος της ειδικής απόκρισης Τ-λεμφοκυττάρων για τον SARS-CoV-2 ήταν σημαντικά υψηλότερο σε αυτούς που παρέμειναν προστατευμένοι από ό,τι σε εκείνους που είχαν μολυνθεί (P <0,0001).% κίνδυνο μόλυνσης, ενώ η υψηλή ένταση μείωσε αυτόν τον κίνδυνο στο 5,4%.Αυτά τα αποτελέσματα γενικεύτηκαν σε επιπλέον 299 συμμετέχοντες που δοκίμασαν μια κλιμακούμενη δοκιμασία τριχοειδούς αίματος που θα μπορούσε να διευκολύνει την πρόσβαση σε δεδομένα ανοσίας Τ-κυττάρων πληθυσμιακής κλίμακας (14,9% έναντι 4,4%).Έτσι, η μέτρηση των Τ-κυττάρων που είναι ειδικά για τον SARS-CoV-2 μπορεί να προβλέψει τον κίνδυνο μόλυνσης και θα πρέπει να αξιολογείται κατά την παρακολούθηση της ανοσολογικής κατάστασης του ατόμου και του πληθυσμού.
Η μέτρηση και η κατανόηση της ανοσολογικής απόκρισης στη λοίμωξη SARS-CoV-2 είναι σημαντική για την ανάπτυξη αποτελεσματικών μελλοντικών στρατηγικών για την ελαχιστοποίηση των επιπτώσεων της δημόσιας υγείας και των οικονομικών επιπτώσεων μελλοντικών εστιών COVID-19.Ο εντοπισμός των ανοσολογικών συσχετισμών θα παρέχει σημαντικές πληροφορίες σχετικά με την ευαισθησία ενός πληθυσμού σε ιογενείς λοιμώξεις, πιθανώς έγκαιρη προειδοποίηση για αιχμής νοσηλειών και επίσης θα επιτρέψει στους ανθρώπους να διαχειριστούν προσωπικά τον κίνδυνο μόλυνσης και τον κίνδυνο μόλυνσης άλλων.Η επιτήρηση του ανοσοποιητικού συστήματος έχει αποδειχθεί κρίσιμη για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των εμβολίων COVID-19 σε υγιείς ασθενείς και ασθενείς υψηλού κινδύνου1,2,3 ειδικά σε μεταλλάγματα SARS-CoV-24 και η ανίχνευση ανοσοκατεσταλμένων θα σημαίνει την ανάγκη ενίσχυσης της ανοσίας Εμβολιαστείτε και αποτρέψτε μελλοντικές εστίες.
Το επίπεδο ανοσίας ενός ατόμου στη λοίμωξη από SARS-CoV-2 εξαρτάται από πολλούς παράγοντες: ιικό φορτίο κατά τη στιγμή της έκθεσης, παραλλαγές ιού, ηλικία, κατάσταση προηγούμενου εμβολιασμού/λοίμωξης, συννοσηρότητες, φάρμακα και το πιο σημαντικό, λοίμωξη κατά του SARS-CoV .2 Η προσαρμοστική ανοσοαπόκριση εμφανίζεται τη στιγμή της έκθεσης στον ιό5.Η αξιολόγηση της ανοσοαπόκρισης στη λοίμωξη από SARS-CoV-2 και/ή στον εμβολιασμό έχει επικεντρωθεί σε ορολογικές αναλύσεις που μετρούν την παρουσία αντισωμάτων ειδικών για μια δομική πρωτεΐνη (π.χ. γλυκοπρωτεΐνη ακίδας).Ωστόσο, η παρουσία ή η απουσία αντισωμάτων από μόνη της δεν καθορίζει με ακρίβεια μια προστατευτική ανοσολογική απόκριση, καθώς οι αποκρίσεις μειώνονται σημαντικά με την πάροδο του χρόνου6 και η εξουδετέρωση των παραλλαγών του SARS-CoV-2 σε αναρρώμενα ή διπλοεμβολιασμένα άτομα Αδύναμη δραστηριότητα, η οποία θα μπορούσε να οδηγήσει σε μεγάλη αριθμός πρωτοποριακών λοιμώξεων7.Πράγματι, η προστασία έναντι του συμπτωματικού COVID-19 που προκαλείται από την παραλλαγή Omicron (B.1.1.529) μειώθηκε σε περίπου 10% μετά από μόλις 4-6 μήνες εμβολιασμού mRNA, αν και η προστασία έναντι σοβαρής νόσου παρέμεινε >68% για τουλάχιστον 7 μήνες8.Η μέτρηση των προσαρμοστικών αποκρίσεων Τ-κυττάρων μνήμης, που παρέχουν μακροπρόθεσμη προστασία από ιογενή λοίμωξη, είναι ο καλύτερος δείκτης ευαισθησίας στη λοίμωξη από SARS-CoV-2 και επομένως καλύτερη ένδειξη του κινδύνου να βγει θετικός στον COVID-199, καθώς το συγκεκριμένο Τ τα κύτταρα μπορούν να αποτρέψουν τη μόλυνση.χωρίς ορομετατροπή10,11.Ωστόσο, η μέτρηση των αποκρίσεων των Τ κυττάρων έχει λάβει λιγότερη προσοχή λόγω μεθοδολογικών δυσκολιών και λογιστικών προβλημάτων στη λήψη και μεταφορά δειγμάτων φλεβικού αίματος, ειδικά κατά τη διεξαγωγή μεγάλων μελετών παρατήρησης για την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας του εμβολίου και την παρακολούθηση της ανοσίας.Ωστόσο, τα εμβολιασμένα άτομα εμφανίζουν ισχυρή δραστηριότητα Τ-λεμφοκυττάρων έναντι των παραλλαγών του SARS-CoV-2, αντισταθμίζοντας δυνητικά την απώλεια αντιδραστικότητας αντισωμάτων για τον περιορισμό της σοβαρότητας του COVID-1912,13.
Εδώ, επιδιώξαμε να καταλάβουμε εάν μία μόνο μέτρηση της απόκρισης των Τ κυττάρων SARS-CoV-2 θα μπορούσε να προβλέψει τον απόλυτο κίνδυνο μόλυνσης από SARS-CoV-2 εντός 6 μηνών από τη δειγματοληψία αίματος, ανεξάρτητα από προηγούμενους παράγοντες που επηρεάζουν το ανοσοποιητικό.Προκειμένου να καταστεί το τεστ Τ κυττάρων υψηλής απόδοσης και να εφαρμοστεί σε μεγαλύτερες μελέτες, προσπαθήσαμε επίσης να κάνουμε τη δοκιμή σε μικρογραφία, ώστε να μπορεί να εκτελεστεί χρησιμοποιώντας ένα τριχοειδές δείγμα αίματος από το δάχτυλο του δακτύλου.
Μετρήσαμε τις κυτταρικές και χυμικές ανοσοαποκρίσεις σε υγιείς δότες χρησιμοποιώντας μια συνδυασμένη ανίχνευση των Τ κυττάρων SARS-CoV-2 και των αντισωμάτων IgG με βάση το πλήρες φλεβικό αίμα (για τα χαρακτηριστικά των συμμετεχόντων, βλ. Μάρτιος 2022 14. Σε εμβολιασμένους δότες, SARS-CoV-2- Οι ειδικές Τ-κυτταρικές αποκρίσεις προσδιορίστηκαν με μέτρηση των επιπέδων ιντερφερόνης-γ (IFN-γ) στο πλάσμα μετά από διέγερση ολικού αίματος με πεπτίδιο SARS-CoV-2 (όπως προηγουμένως, αναφ. 14,15,16,17,18) και σχετιζόμενες αποκρίσεις IgG με νουκλεοκαψίδιο (Ν) αυξήθηκαν σε εκείνους που ανέφεραν προηγούμενη λοίμωξη, αν και και οι δύο αποκρίσεις ήταν υψηλότερες σε προηγουμένως μολυσμένους μη εμβολιασμένους δότες, μέγιστες στο σώμα (Εικ. 1α, β). ήταν οι υψηλότερες σε προηγουμένως μολυσμένους εμβολιασμένους δότες (Εικόνα 1γ–ε).
Οι αποκρίσεις των ειδικών για τον SARS-CoV-2 IFN-γ+ Τ κυττάρων μετρήθηκαν με ανάλυση φλεβικού ολικού αίματος και με βάση τους εμβολιασμούς των συμμετεχόντων και την προηγούμενη κατάσταση μόλυνσης από SARS-CoV-2 (επιβεβαιώθηκε με PCR ή/και δοκιμή πλευρικής ροής)' Vac + /Inf +' n = 60 (πράσινο), 'Vac + /Inf-' n = 82 (μπλε), 'Vac-/Inf +' n = 4 (κίτρινο), 'Vac-/Inf-' n = 1 (ανεφάρμοστος).Οι ειδικές για τον SARS-CoV-2 αντιδράσεις δέσμευσης IgG στοχεύουν το νουκλεοκαψίδιο («Ν») (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), τον αιχμηρό τομέα δέσμευσης υποδοχέα («RBD») (γ; ** P = 0,0022, *P < 0,015), υπομονάδα ακίδας 1 ("S1") (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ έναντι Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ έναντι Vac+/Inf-) P = 0,012) και η υπομονάδα αιχμής 2 ("S2") (ε) μετρήθηκε με εξετάσεις φλεβικού ολικού αίματος και με βάση τον εμβολιασμό των συμμετεχόντων και τον προηγούμενο SARS -CoV-2 (επιβεβαιώθηκε με PCR και/ ή δοκιμή πλευρικής ροής) μολυσματική κατάσταση.'Vac + /Inf +' n = 60 (πράσινο), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (μπλε), 'Vac-/Inf +' n = 4 (κίτρινο).Οι συγκρίσεις έγιναν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Kruskal-Wallis, προσαρμοσμένη για πολλαπλές συγκρίσεις χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Dunn.Τα δεδομένα εμφανίζονται ως γραφήματα (κεντρική γραμμή στη μέση, άνω όριο στο 75ο εκατοστημόριο, κάτω όριο στο 25ο εκατοστημόριο) με μουστάκια στην ελάχιστη και στη μέγιστη τιμή.Κάθε κουκκίδα αντιπροσωπεύει έναν δότη.Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα παρέχονται με τη μορφή αρχείων πρωτογενών δεδομένων.
Μετά τη δειγματοληψία αίματος, ζητήθηκε από τους συμμετέχοντες να αναφέρουν μόνοι τους θετικά αποτελέσματα δοκιμασίας PCR ή/και πλευρικής ροής για COVID-19.εάν οι συμμετέχοντες βρέθηκαν θετικοί μεταξύ της 1ης Σεπτεμβρίου 2021 και της 29ης Δεκεμβρίου 2021, εικαζόταν ότι είχαν μολυνθεί από την παραλλαγή του κορωνοϊού Delta (B.1.617.2) και το Omicron (B.1.1.529) στη Δημόσια Υγεία της Ουαλίας μετά τις 29 Δεκεμβρίου 2021, όταν αυτή η επιλογή ανησυχίας γίνεται κυρίαρχη.Μεταξύ 148 αξιολογήσιμων δοτών, παρατηρήσαμε ποσοστό μόλυνσης 26,3% (39/148) εντός 6 μηνών από την αιμοδοσία, 38 από τους οποίους έλαβαν δεύτερη ή τρίτη δόση του εμβολίου για τον COVID-19 (η ανακάλυψη της μόλυνσης προέκυψε μετά την Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) εμβόλιο mRNA ή εμβόλιο AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19)).μολύνθηκε επίσης ένας μη εμβολιασμένος δότης.Το μέγεθος των ειδικών για τον SARS-CoV-2 IFN-γ-θετικές αποκρίσεις Τ-λεμφοκυττάρων ήταν σημαντικά χαμηλότερο σε εκείνους που ανέφεραν θετικό διαγνωστικό τεστ για τον COVID-19 από ό,τι σε μη μολυσμένους δότες (P < 0,0001; Εικ. 2α), κυρίως λόγω βέλτιστη επαγωγή των αποκρίσεων των Τ κυττάρων με εμβολιασμό σε ορισμένους συμμετέχοντες (Ρ = 0,050, Συμπληρωματικό Σχήμα 1).Δεν υπήρχε συσχέτιση μεταξύ του μεγέθους της απόκρισης των Τ κυττάρων IFN-γ+ και του χρόνου για ένα θετικό αποτέλεσμα δοκιμής COVID-19 (Συμπληρωματικό Σχήμα 2).Αντίθετα, ούτε οι αποκρίσεις IgG που δεσμεύουν RBD-, S1-, S2 (Εικόνες 2b–d) ούτε οι αποκρίσεις αντισωμάτων εξουδετέρωσης RBD-, S1 ήταν ειδικές για άγριου τύπου ή δέλτα SARS-CoV-2 (B.1.617).) (Συμπληρωματικό Σχ. 3) μπορεί να διακρίνει μεταξύ ατόμων που διατρέχουν κίνδυνο μόλυνσης.Ωστόσο, οι χαμηλές αποκρίσεις IgG με N-συνδεδεμένο κατά του SARS-CoV-2 συσχετίστηκαν με τον κίνδυνο μόλυνσης από COVID-19 (P = 0,0084; Εικόνα 2e).εκείνοι που βρέθηκαν θετικοί είχαν 85% λιγότερες πιθανότητες (P = 0,00035, OR 0,15, 95).% CI: 0,047–0,39 (Συμπληρωματικό Σχήμα 4).
Δείγματα φλεβικού αίματος από υγιείς δότες (n = 148) αξιολόγησαν τις ειδικές για τον SARS-CoV-2 αποκρίσεις IFN-γ+ Τ-κυττάρων (α; ****P <0,0001) και τη δέσμευση του υποδοχέα Spike στον συγκεκριμένο SARS-CoV -2 ερέθισμα.τομέας ("RBD") (b), υπομονάδα ακίδας 1 ("S1″) (c), υπομονάδα ακίδας 2 ("S2") (d) και νουκλεοκαψίδιο ("N") (e; **P = 0,0084 ) .Ταυτοποιήθηκαν οι συμμετέχοντες που βρέθηκαν θετικοί στον COVID-19 (PCR ή/και πλευρική ροή).όλες οι λοιμώξεις εμφανίστηκαν εντός 6 μηνών από την αιμοληψία.Οι συγκρίσεις έγιναν χρησιμοποιώντας ένα τεστ Mann-Whitney με δύο ουρές.Τα δεδομένα εμφανίζονται ως γραφήματα (κεντρική γραμμή στη μέση, άνω όριο στο 75ο εκατοστημόριο, κάτω όριο στο 25ο εκατοστημόριο) με μουστάκια στην ελάχιστη και στη μέγιστη τιμή.Κάθε κουκκίδα αντιπροσωπεύει έναν δότη.Το ns δεν είναι σημαντικό.Ο χάρτης θερμότητας f δείχνει τους συσχετισμούς κατάταξης του Spearman μεταξύ των μεταβλητών για το καθορισμένο σύνολο δεδομένων.Οι συγκρίσεις που δεν ήταν στατιστικά σημαντικές εξαιρέθηκαν από τη μήτρα και σημειώθηκαν με κενά κελιά.Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα παρέχονται με τη μορφή αρχείων πρωτογενών δεδομένων.
Η προκαθορισμένη διαγνωστική θετική αποκοπή των 14 θεωρήθηκε πολύ αυθαίρετη για να εκτιμηθεί ο κίνδυνος επαναμόλυνσης, επομένως καθορίστηκαν διατεταρτημοριακά εύρη για τον καθορισμό παραμέτρων απόλυτου κινδύνου.Το στατιστικό μοντέλο, το οποίο περιελάμβανε μόνο μεταβλητές που είχαν σημαντική επίδραση στα αποτελέσματα, έδειξε ότι το μέγεθος της ειδικής για τον SARS-CoV-2 απόκριση των κυττάρων Τ IFN-γ+ ήταν ο πιο σημαντικός ανοσολογικός βιοδείκτης για τον προσδιορισμό των πιθανοτήτων ενός ατόμου να είναι δοκιμαστεί για COVID.-19 θετικό (Εικόνα 2στ και Συμπληρωματικό Σχήμα 4).Ασθενείς με ειδική ανταπόκριση του SARS-CoV-2 IFN-γ+ Τ κυττάρων στο τρίτο (194-489 pg/ml IFN-γ) και στο τέταρτο (>489 pg/ml IFN-γ) τεταρτημόρια 65% (P = 0,055; Ή 0,35, 95% CI: 0,11–1,00) και το 90% (P = 0,0050, OR 0,098, 95% CI: 0,014–0,42) είχαν περισσότερους συμμετέχοντες.Οι πιθανότητες είναι ελάχιστες (Συμπληρωματικό Σχ. 4).Συνολικά, οι συμμετέχοντες με ειδική απόκριση Τ-λεμφοκυττάρων SARS-CoV-2 από φλεβικό αίμα ≤79 pg/mL IFN-γ είχαν 43,2% κίνδυνο εμφάνισης λοίμωξης σε 6 μήνες, σε σύγκριση με ανταπόκριση >489 pg/mL.ml IFN-γ είχαν κίνδυνο μόλυνσης 5,4% (πίνακας 2).
Ο έλεγχος φλεβικού ολικού αίματος είναι περιορισμένος σε εύρος λόγω της ανάγκης συλλογής δείγματος από τον φλεβοτόμο.Για να αυξηθεί η διαθεσιμότητα των δοκιμών Τ-λεμφοκυττάρων και IgG για SARS-CoV-2, έχει αναπτυχθεί μια εναλλακτική μέθοδος δειγματοληψίας τριχοειδούς αίματος που επιτρέπει στους συμμετέχοντες να λαμβάνουν δείγματα αίματος από το δάχτυλο στο σπίτι.Από όσο γνωρίζουμε, δεν έχουν υπάρξει προηγούμενες αναφορές για τη μέτρηση της λειτουργίας των ειδικών για αντιγόνο Τ κυττάρων σε δείγματα τριχοειδούς αίματος.Έχει αποδειχθεί προηγουμένως ισχυρή συσχέτιση μεταξύ του αριθμού των λεμφοκυττάρων που ελήφθησαν χρησιμοποιώντας συγκρίσιμα δείγματα τριχοειδούς και φλεβικού αίματος.Επιπλέον, έχει αναφερθεί ότι οι δοκιμές ολικού αίματος που μετρούν τις ειδικές για τον SARS-CoV-2 αποκρίσεις Τ κυττάρων χρησιμοποιούν μόνο 320 μL φλεβικού αίματος20, εξαλείφοντας τις ανησυχίες σχετικά με τη συχνότητα των προγονικών Τ κυττάρων σε δείγματα τριχοειδούς αίματος.
Χρησιμοποιήσαμε αυτόν τον τυποποιημένο συνεργατικό προσδιορισμό υψηλής απόδοσης των Τ κυττάρων SARS-CoV-2 και των αντισωμάτων IgG με βάση το τριχοειδές ολικό αίμα για τη μέτρηση της κυτταρικής και χυμικής ανοσολογικής απόκρισης σε συμμετέχοντες με διάφορες συννοσηρότητες και κατάσταση προηγούμενου εμβολιασμού/λοίμωξης (Πίνακας 1).στρατολογήθηκαν από όλο το Ηνωμένο Βασίλειο μεταξύ 24 Ιανουαρίου και 14 Μαρτίου 202214. Η πλειοψηφία (90,9%) των δειγμάτων δακτύλων ελήφθη σωστά και στάλθηκαν στο εργαστήριο εντός 24 ωρών από τη συλλογή.Σε ορισμένες περιπτώσεις, τα δείγματα ελήφθησαν εντός 48 ωρών από την αιμοληψία, αλλά κανένα από αυτά τα δείγματα δεν πέρασε από ελέγχους ποιότητας και δεν επηρέασε τις συνολικές μετρήσεις Τ-κυττάρων ή αντισωμάτων (Συμπληρωματικό Σχ. 5).Αν και υπήρχαν διαφορές στο μέγεθος της ειδικής απόκρισης του SARS-CoV-2 IFN-γ+ Τ κυττάρων που μετρήθηκε σε αντίστοιχα δείγματα τριχοειδούς και φλεβικού αίματος σε ορισμένα άτομα, δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές συνολικά (P = 0,88, Συμπληρωματικό Σχ. 6 ).).
Οι ειδικές για τον SARS-CoV-2 αποκρίσεις Τ-κυττάρων IFN-γ+ αυξήθηκαν σημαντικά σε εμβολιασμένα άτομα που ανέφεραν επίσης προηγούμενη λοίμωξη (P = 0,0001), αλλά όχι σημαντικά υψηλότερα από ό,τι σε προηγουμένως μολυσμένα μη εμβολιασμένα άτομα δότες (P = 0,19, Εικ. 3α).).Οι αποκρίσεις IgG έναντι της γλυκοπρωτεΐνης ακίδας (RBD, S1, S2) ήταν σημαντικά υψηλότερες σε εμβολιασμένους δότες από ό,τι σε μη εμβολιασμένους δότες, ανεξάρτητα από την προηγούμενη κατάσταση μόλυνσης (Εικόνα 3β-δ).Είναι ενδιαφέρον ότι η μέση N-δεσμευμένη απόκριση IgG ήταν υψηλότερη στους μη εμβολιασμένους συμμετέχοντες που είχαν μολυνθεί προηγουμένως σε σύγκριση με τους εμβολιασμένους συμμετέχοντες, αν και αυτό δεν είχε σημασία (Εικόνα 3e).Μεταξύ των μη εμβολιασμένων και μη μολυσμένων δοτών που δήλωσαν οι ίδιοι, 15 από τους 37 (40,5%) συμμετέχοντες ήταν θετικοί για N-συνδεδεμένη IgG, πάνω από το προηγουμένως καθορισμένο όριο των 2,0 BAU/mL14.αυτοί οι 15 συμμετέχοντες Δώδεκα από αυτούς τους ασθενείς βρέθηκαν θετικοί για ανταπόκριση Τ κυττάρων IFN-γ+ πάνω από το προηγουμένως καθορισμένο όριο των 22,7 pg/mL IFN-γ14.Ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι αυτοί οι συμμετέχοντες είχαν μολυνθεί προηγουμένως με SARS-CoV-2 και δεν είχαν δοκιμαστεί για COVID-19 λόγω προσωπικής επιλογής, έλλειψης εξοπλισμού PCR ή/και πλευρικής ροής ή ήταν ασυμπτωματικοί.Αν και υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ των ανταποκρίσεων των Τ κυττάρων σε επίπεδα IFN-γ+ και N-συνδεδεμένης IgG σε μη εμβολιασμένους δότες (P = 0,0044, Συμπληρωματικό Σχήμα, η N-συνδεδεμένη απόκριση IgG μειώθηκε ταχύτερα από τη N-συνδεδεμένη IgG, ενώ η IFN-γ Οι αποκρίσεις των κυττάρων Τ διατηρήθηκαν ανεξάρτητα από την κατάσταση εμβολιασμού, αν και ο αριθμός των δοτών στις 50 εβδομάδες μετά την πρόκληση ήταν χαμηλός (Συμπληρωματικό Σχήμα 8). Ο τύπος εμβολιασμού ήταν γενικά ελάχιστα διαφορετικός στις παρατηρούμενες αποκρίσεις IgG ειδικές για SARS-CoV-2, T κύτταρα και σχετιζόμενα με RBD, αν και οι συμμετέχοντες που έλαβαν δύο δόσεις BNT162b2 ακολουθούμενες από επαναεμβολιασμό mRNA1273 έδειξαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα IFN-γ + Τ κυττάρων ήταν πιο ευαίσθητοι στο SARS-CoV-2 από εκείνους που έλαβαν δύο δόσεις ChAdOx1 και BNT162b2 (Συμπληρωματικό Εικ. 9) Επιπλέον, οι αναφερόμενες συννοσηρότητες είχαν μικρή συνολική διαφορά στις παρατηρούμενες αποκρίσεις Τ κυττάρων σε σύγκριση με υγιείς δότες (Συμπληρωματικό Σχήμα 10).
Οι αποκρίσεις των ειδικών για τον SARS-CoV-2 IFN-γ+ Τ-λεμφοκυττάρων μετρήθηκαν με δοκιμασία τριχοειδούς ολικού αίματος και βασίστηκαν στους εμβολιασμούς των συμμετεχόντων και στην προηγούμενη λοιμώδη κατάσταση του SARS-CoV-2 (επιβεβαιώθηκε με τεστ PCR ή/και πλευρικής ροής).'Vac + /Inf +' n = 42 (πράσινο), 'Vac + /Inf-' n = 158 (μπλε), 'Vac-/Inf +' n = 33 (κίτρινο), 'Vac- /Inf-' n = 37 (γκρι).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- έναντι Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ vs. Vac- /Inf-) P = 0,014 .Αντιδράσεις δέσμευσης IgG ειδικών SARS-CoV-2 στον τομέα δέσμευσης υποδοχέα ακίδας ("RBD") (b; ****P <0,0001, ns: μη σημαντικό), υπομονάδα ακίδας 1 ("S1") (c; * * **P <0,0001, ns: μη σημαντικό), υπομονάδα ακίδας 2 ("S2″) (d; ****P <0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016 ) και νουκλεοκαψίδιο ("N") (ε; ****P < 0,0001, ns μη σημαντικό) μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ανάλυση φλεβικού ολικού αίματος και με βάση τους εμβολιασμούς των συμμετεχόντων και τον προηγούμενο SARS-CoV-2 (που επιβεβαιώθηκε με ανάλυση PCR ή/και πλευρικής ροής) Οι λοιμώξεις υποδιαιρέθηκαν σε κατάσταση.'Vac + /Inf +' n = 46 (πράσινο), 'Vac + /Inf-' n = 182 (μπλε), 'Vac-/Inf +' n = 34 (κίτρινο), 'Vac-/Inf-' n = 37 (γκρι).Οι συγκρίσεις έγιναν χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Kruskal-Wallis, προσαρμοσμένη για πολλαπλές συγκρίσεις χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Dunn.Τα δεδομένα εμφανίζονται ως γραφήματα (κεντρική γραμμή στη διάμεσο, άνω όριο στο 75ο εκατοστημόριο, κάτω όριο στο 25ο εκατοστημόριο) με μουστάκια στην ελάχιστη και στη μέγιστη τιμή.Κάθε κουκκίδα αντιπροσωπεύει έναν δότη.Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα παρέχονται με τη μορφή αρχείων πρωτογενών δεδομένων.
Όπως και πριν, ζητήθηκε από τους συμμετέχοντες να αναφέρουν θετικά αποτελέσματα PCR ή/και πλευρικής ροής αίματος για τον COVID-19.σύμφωνα με την Υπηρεσία Υγείας του Ηνωμένου Βασιλείου, οι συμμετέχοντες εικάζεται ότι είχαν μολυνθεί από τον κοροναϊό Omicron (B.1.1.529) τη στιγμή της δοκιμής της θετικής παραλλαγής του ιού, καθώς ήταν η κυρίαρχη παραλλαγή στο Ηνωμένο Βασίλειο κατά την περίοδο της μελέτης.Μεταξύ 299 αξιολογήσιμων δοτών, παρατηρήσαμε ποσοστό μόλυνσης 8,0% (24/299) εντός τριών μηνών από τη δωρεά τριχοειδών, επτά από τους οποίους δεν εμβολιάστηκαν.Το ποσοστό των συννοσηροτήτων μεταξύ όλων των συμμετεχόντων ήταν χαμηλότερο σε όσους βρέθηκαν θετικοί στον COVID-19 (10,7%) από εκείνους που βρέθηκαν αρνητικοί για COVID-19 (24,4%, Πίνακας 1), γεγονός που μπορεί να οφείλεται στο γεγονός ότι οι συμμετέχοντες με ορισμένες οι ασθένειες είναι πιο προσεκτικές και προστατεύουν από πιθανές συνέπειες όπως ο διαβήτης και ο καρκίνος.Όπως παρατηρήθηκε σε μια κοόρτη φλεβικού αίματος, θετικά Τ-λεμφοκύτταρα ιντερφερόνης-γ (IFN-γ) για SARS-CoV-2 μετρήθηκαν σε δείγματα τριχοειδούς αίματος από άτομα που ανέφεραν θετικό διαγνωστικό τεστ για COVID-19.Το μέγεθος της απόκρισης ήταν σημαντικά χαμηλότερο από ό,τι σε μη μολυσμένους δότες (Ρ = 0,034, Εικόνα 4α) λόγω της σχετικά κακής επαγωγής μιας απόκρισης Τ κυττάρων με εμβολιασμό και/ή προηγούμενη μόλυνση (Συμπληρωματικό Σχήμα 11).Ομοίως, ούτε οι αποκρίσεις IgG που δεσμεύουν τα RBD-, S1-, S2 (Εικόνες 4b–d) ούτε οι αποκρίσεις αντισωμάτων εξουδετέρωσης RBD-, S1 ήταν ειδικές για άγριου τύπου ή δέλτα SARS-CoV-2 (Β. 1.617).(Συμπληρωματικό σχήμα 12).Μπορούν να εντοπιστούν άτομα με οποιονδήποτε σημαντικό κίνδυνο μόλυνσης.Σε αντίθεση με τη φλεβική κοόρτη, οι σχετιζόμενες με το Ν αποκρίσεις IgG επίσης δεν διαφοροποιούν τον κίνδυνο COVID-19 (Εικόνα 4e), υποδηλώνοντας ότι η παραλλαγή Omicron (B.1.1.529) αυξάνει την ανοσολογική διαφυγή σε άτομα που είχαν μολυνθεί προηγουμένως, όπως περιγράφηκε πρόσφατα 21. Αντίθετα, η ισχύς της ειδικής για τον SARS-CoV-2 ανταπόκριση των Τ-κυττάρων IFN-γ ήταν και πάλι η πιο σημαντική μεταβλητή για τον προσδιορισμό των μεμονωμένων πιθανοτήτων θετικού τεστ για COVID-19 (Εικόνα 4στ).Συνολικά, οι συμμετέχοντες με ανταπόκριση τριχοειδών Τ-λεμφοκυττάρων ειδική για SARS-CoV-2 ≤23,7 pg/mL IFN-γ είχαν 14,9% κίνδυνο μόλυνσης σε τρεις μήνες σε σύγκριση με ανταπόκριση >141,6 pg/mL.ml IFN.-γ είχε κίνδυνο μόλυνσης 4,4% (Πίνακας 2).
Αποκρίσεις Τ κυττάρων IFN-γ+ ειδικές για SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) και ειδική για SARS-CoV-2 στοχευμένη περιοχή δέσμευσης υποδοχέα IgG ("RBD") (b), υπομονάδα ακίδας 1 (' S1') (γ), υπομονάδα ακίδας 2 ('S2') (δ) και αντίδραση δέσμευσης νουκλεοκαψιδίου ('Ν') (ε).Οι συμμετέχοντες που αναγνωρίστηκαν ως θετικοί σε τεστ COVID-19 (PCR και/ή τεστ πλευρικής ροής αίματος), όλες οι λοιμώξεις εμφανίστηκαν εντός 3 μηνών από τη δειγματοληψία αίματος.Οι συγκρίσεις έγιναν χρησιμοποιώντας ένα τεστ Mann-Whitney με δύο ουρές.Τα δεδομένα εμφανίζονται ως γραφήματα (κεντρική γραμμή στη μέση, άνω όριο στο 75ο εκατοστημόριο, κάτω όριο στο 25ο εκατοστημόριο) με μουστάκια στην ελάχιστη και στη μέγιστη τιμή.Κάθε κουκκίδα αντιπροσωπεύει έναν δότη.Το ns δεν είναι σημαντικό.Ο χάρτης θερμότητας f δείχνει τους συσχετισμούς κατάταξης του Spearman μεταξύ των μεταβλητών για το καθορισμένο σύνολο δεδομένων.Οι συγκρίσεις που δεν ήταν στατιστικά σημαντικές εξαιρέθηκαν από τη μήτρα και σημειώθηκαν με κενά κελιά.Τα ανεπεξέργαστα δεδομένα παρέχονται με τη μορφή αρχείων πρωτογενών δεδομένων.
Καθώς προχωράμε στην επόμενη φάση της πανδημίας COVID-19, η εστίαση θα μετατοπιστεί από την πρόληψη στη διαχείριση ατομικών κινδύνων και στον εντοπισμό ευάλωτων μελών της κοινωνίας.Η δημιουργία συσχετισμών ανοσίας στον COVID-19 είναι κρίσιμης σημασίας για τον αποτελεσματικό εντοπισμό και τη θεραπεία αυτών των ομάδων υψηλού κινδύνου.Υπάρχουν πλέον αυξανόμενες ενδείξεις ότι η ανοσία των Τ-κυττάρων προστατεύει από τη μόλυνση από SARS-CoV-2 και περιορίζει τη σοβαρότητα του COVID-1910.Τα δεδομένα που παρουσιάζονται εδώ καταδεικνύουν ότι η συνδυασμένη ισχύς των ειδικών για τον SARS-CoV-2 αποκρίσεις IFN-γ+ Τ κυττάρων έναντι των δομικών πρωτεϊνών της ακίδας, της μεμβράνης και του νουκλεοκαψιδίου προσφέρει μεγαλύτερη προστασία έναντι του COVID-19 από ό,τι η δέσμευση αντισωμάτων.19 προάγει ή εξουδετερώνει τις αποκρίσεις .και θα πρέπει να λαμβάνεται υπόψη κατά την αξιολόγηση της ανοσίας του ατόμου ή/και της αγέλης.Οι ιοί RNA όπως ο SARS-CoV-2 ή ο ιός της γρίπης Α (IAV) αποφεύγουν την ορολογική εξουδετέρωση με την ταχεία εξέλιξη των εκτεθειμένων επιτόπων Β-κυττάρων σε επιφανειακά αντιγόνα που αναγνωρίζονται από αντισώματα.Η προστατευτική ανοσοαπόκριση που παρέχεται από τα Τ κύτταρα μπορεί να αντανακλά τη στόχευση επιτόπων από πιο διατηρημένες περιοχές ιικών πρωτεϊνών που δεν μπορούν να ξεφύγουν γρήγορα από μια ανοσοαπόκριση.Η προστασία με τη μεσολάβηση Τ-λεμφοκυττάρων έναντι των νέων παραλλαγών του SARS-CoV-2 είναι παρόμοια με την ετερουποτυπική προστασία που προκαλείται από τη στόχευση Τ-λεμφοκυττάρων διατηρημένων εγγενών πρωτεϊνών που παρατηρείται στους υποτύπους IAV22,23.
Παρά τις τεράστιες δυνατότητες για τη μέτρηση της κυτταρικής ανοσολογικής απόκρισης στον COVID-19, έχει δοθεί σχετικά λίγη προσοχή στην ανάπτυξη ακριβών, υψηλής απόδοσης, τυποποιημένων αναλύσεων Τ-κυττάρων.Οι παραδοσιακές πολυπλοκότητες και το κόστος που σχετίζονται με τη μέτρηση των αποκρίσεων των Τ κυττάρων αποκλείουν τον ακριβή προσδιορισμό της ανοσίας των Τ κυττάρων κατά τον έλεγχο για ανοσία μεγάλου πληθυσμού.Ενώ αρκετές εμπορικές δοκιμασίες διέγερσης πεπτιδίων ολικού αίματος έχουν γίνει πρόσφατα διαθέσιμες, όλοι χρειάζονται επί του παρόντος έναν φλεβοτόμο για τη λήψη αίματος, περιορίζοντας τη διαθεσιμότητα και την κλίμακα.Τα συστήματα τριχοειδούς αίματος χρησιμοποιούνται ευρέως για τον προσδιορισμό του επιπολασμού των αντισωμάτων SARS-CoV-2 σε έναν πληθυσμό.Προσαρμόσαμε αναλύσεις τριχοειδούς αίματος για να πραγματοποιήσουμε δοκιμές διέγερσης πεπτιδίων ολικού αίματος για να αξιολογήσουμε την αντιδραστικότητα των Τ κυττάρων στις δομικές πρωτεΐνες SARS-CoV-2 και στις ειδικές αποκρίσεις αντισωμάτων SARS-CoV-2.Στην πραγματικότητα, η συνδυασμένη μέτρηση των ειδικών για τον SARS-CoV-2 αντισωμάτων και των Τ κυττάρων στο ίδιο δείγμα τριχοειδούς αίματος είναι πολύ ελκυστική: (i) μειώνει την ανάγκη για πολλαπλές εξετάσεις αίματος ανά συμμετέχοντα, (ii) βελτιώνει την εμπειρία και την κατανόηση των συμμετεχόντων.(iii) βελτίωση της εφοδιαστικής και μείωση των επικαλύψεων, (iv) μείωση των περιβαλλοντικών επιπτώσεων καθώς απαιτούνται λιγότερα εργαστηριακά αναλώσιμα και παράδοση δειγμάτων.Αν και η συνολική αντιδραστικότητα της IFN-γ ήταν παρόμοια μεταξύ δειγμάτων ταιριάσματος φλεβικού και τριχοειδούς αίματος, παρατηρήθηκε ότι ήταν χαμηλότερη στην ομάδα τριχοειδούς αίματος των συμμετεχόντων (Εικ. 4α) σε σύγκριση με την κοόρτη φλεβικού αίματος (Εικ. 2α).Τιμές IFN-γ Υπάρχουν πολλές εξηγήσεις για αυτό το εύρημα, συγκεκριμένα, ένας μεγάλος αριθμός συμμετεχόντων με συννοσηρότητες που απαιτούν ανοσοκατασταλτική θεραπεία στρατολογήθηκαν στην ομάδα δειγματοληψίας αίματος τριχοειδών (Πίνακας 1) και η βιωσιμότητα και/ή η λειτουργία των Τ κυττάρων που ελήφθησαν από αγγειακά Τα δείγματα μπορεί να είναι χαμηλά, ειδικά λαμβάνοντας υπόψη τις συνθήκες μακροχρόνιας αποθήκευσης των δειγμάτων πριν από την πεπτιδική διέγερση.
Το ευρέως διαθέσιμο εμβόλιο COVID-19 παρέχει την καλύτερη προστασία έναντι σοβαρής νόσου για τους περισσότερους λήπτες εντός 6 μηνών από τον εμβολιασμό8.Ενθαρρυντικά, παρά την κακή ορολογική εξουδετέρωση των παραλλαγών του SARS-CoV-26,7 που προκαλείται από το εμβόλιο, οι αποκρίσεις των Τ-κυττάρων που προκλήθηκαν από τον εμβολιασμό κατά του SARS-CoV-2 άγριου τύπου παρέμειναν εξαιρετικά αντιδραστικές, καθώς εμφανίστηκαν άλλα 25.Τα δεδομένα που παρουσιάζουμε εδώ καταδεικνύουν τη σημασία μιας ευρύτερης αξιολόγησης της ανοσογονικότητας του εμβολίου, τονίζοντας τα εμβόλια με ανεπαρκή ανοσία των Τ-κυττάρων για την πρόληψη της ξαφνικής μόλυνσης και της επίμονης μετάδοσης του ιού.Παρατηρήσαμε επίσης ότι πολλά μη εμβολιασμένα άτομα που στρατολογήθηκαν στην τριχοειδική κοόρτη είχαν σημαντική ανταπόκριση σε ειδικά Τ-λεμφοκύτταρα SARS-CoV-2 (και N-δεσμευτικά IgG) ανεξάρτητα από τον προηγούμενο εμβολιασμό, κάτι που πιθανότατα οφείλεται σε προηγούμενη μόλυνση.Αντί να εμβολιάζονται τα κατάλληλα άτομα, ο κίνδυνος μόλυνσης θα πρέπει να αξιολογείται με βάση την τρέχουσα κατάσταση εμβολιασμού και τις ενημερωμένες επιλογές που έχουν γίνει.
Οι περιορισμοί αυτής της μελέτης περιλαμβάνουν τη διαβεβαίωση ότι οι συμμετέχοντες ανέφεραν μόνοι τους μόλυνση με SARS-CoV-2 μετά τη συλλογή αίματος για τον προσδιορισμό της συνάφειας της ανοσίας.ορισμένοι συμμετέχοντες μπορεί να έχουν ασυμπτωματική λοίμωξη και να μην μπορούν να υποβληθούν σε δοκιμασία PCR ή/και πλευρικής ροής για COVID-19.Το σύνολο δεδομένων μας δεν είχε επίσης πληροφορίες σχετικά με τα φάρμακα των συμμετεχόντων κατά τη στιγμή της αιμοληψίας.Επιπλέον, δεδομένου ότι όλοι οι συμμετέχοντες ανέφεραν μόνο ήπια/μέτρια συμπτώματα ή καθόλου συμπτώματα, δεν ήταν δυνατό να εντοπιστούν ανοσοαποκρίσεις από το σύνολο δεδομένων μας που προέβλεπαν αυξημένο κίνδυνο σοβαρής ασθένειας και νοσηλείας για τον COVID-19.Ωστόσο, η παρουσία αποκρίσεων CD8+ Τ κυττάρων έναντι επιτόπων ειδικών για νουκλεοκαψίδια έχει πρόσφατα συσχετιστεί με προστασία έναντι του σοβαρού COVID-1926.Επιπλέον, ο προσδιορισμός που χρησιμοποιήθηκε εδώ δεν μέτρησε τις αποκρίσεις των Τ-λεμφοκυττάρων σε συγκεκριμένες πρώιμες εκφρασμένες μη δομικές πρωτεΐνες SARS-CoV-2 που έχει πρόσφατα αποδειχθεί ότι συσσωρεύονται κατά προτίμηση σε οροαρνητικούς εργαζόμενους στον τομέα της υγείας που ήρθαν σε επαφή με μολυσμένους ασθενείς.Με βάση αυτήν την εργασία, δεδομένης της επικράτησης της μετάδοσης στην κοινότητα κατά τη στιγμή της στρατολόγησης και της υψηλής πιθανότητας μόλυνσης εξ επαφής στον πληθυσμό, ο αριθμός των ειδικών Τ-λεμφοκυττάρων SARS-CoV-2 που βρέθηκαν στις δοκιμές μας φαίνεται επίσης να μπορεί να εκκαθαριστεί.υποκλινικές λοιμώξεις στις κοόρτες μας.Τέλος, δεν μετρήσαμε την παραγωγή ιντερλευκίνης 2 από Τ κύτταρα επειδή η προηγούμενη εργασία μας έδειξε ανεπαρκή αναγνώριση των ειδικών για τον SARS-CoV-214 αποκρίσεις Τ-κυττάρων, αν και οι ειδικές για την IL-2 αποκρίσεις μπορεί να υποδεικνύουν προϋπάρχουσα διασταυρούμενη αντιδραστικότητα.κύτταρα που σχετίζονται με την άμυνα έναντι της μόλυνσης από SARS-CoV-211.
Συνολικά, αυτά τα δεδομένα υπογραμμίζουν τη θεμελιώδη ανάγκη για μακροπρόθεσμες διαχρονικές μελέτες που ενσωματώνουν τις ειδικές για τον SARS-CoV-2 αποκρίσεις Τ-λεμφοκυττάρων σε μέτρα ανοσίας πληθυσμιακής κλίμακας.Αυτές οι προσπάθειες μπορεί να βοηθηθούν από την ανάπτυξη μιας νέας τριχοειδούς εξέτασης αίματος που μετρά την απόκριση των Τ-κυττάρων.
Το ερευνητικό έργο προσέλαβε συμμετέχοντες από τον Φεβρουάριο του 2021 έως τον Μάρτιο του 2022. Η ομάδα των υγιών δοτών (n = 148) που έδωσαν δείγματα φλεβικού αίματος αποτελούνταν κυρίως από πανεπιστημιακό προσωπικό και φοιτητές που συμμετείχαν στην υπηρεσία προσυμπτωματικού ελέγχου COVID-19 του Πανεπιστημίου του Κάρντιφ ή προσωπικό σε δημοτικό σχολείο στο Κάρντιφ.Όλοι οι συμμετέχοντες ήταν κατά τα άλλα υγιείς και δεν ανέφεραν ότι έπαιρναν ανοσοκατασταλτικά φάρμακα (βλ. Πίνακα 1 για χαρακτηριστικά).Η ομάδα των συμμετεχόντων που έδωσαν δείγματα τριχοειδούς αίματος περιελάμβανε όλους τους εθελοντές δότες (ηλικίας 18+) από όλο το Ηνωμένο Βασίλειο.Μεταξύ 24 Ιανουαρίου και 14 Μαρτίου 2022, 342 συμμετέχοντες εγγράφηκαν στη μελέτη, εκ των οποίων οι 299 υπέβαλαν δείγματα αίματος στο εργαστήριο.Πολλοί συμμετέχοντες παρέμειναν μη εμβολιασμένοι και/ή ανέφεραν σοβαρές συννοσηρότητες, συμπεριλαμβανομένων αυτοάνοσων νοσημάτων και καρκίνου (βλ. Πίνακα 1 για χαρακτηριστικά).Αυτή η μελέτη έλαβε δεοντολογική έγκριση από την Επιτροπή Δεοντολογίας Έρευνας του Newcastle and North Tyneside 2 (ID IRAS: 294246) και την Επιτροπή Δεοντολογίας της Ιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου του Cardiff (αναφ. SREC: SMREC 21/01).Όλοι οι συμμετέχοντες έδωσαν γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση πριν από την ένταξη.Οι συμμετέχοντες δεν έλαβαν καμία αποζημίωση για τη συμμετοχή τους σε αυτή τη μελέτη.
Δείγματα φλεβικού αίματος ελήφθησαν με φλεβοκέντηση σε vacutainers ηπαρίνης 6 ή 10 ml λιθίου ή νατρίου (BD).Δείγματα τριχοειδούς αίματος ελήφθησαν με βελόνα δακτύλου και στη συνέχεια συλλέχθηκαν σε μικροδοχεία ηπαρίνης (BD).Απαιτείται τουλάχιστον 400 µl αίματος.οποιοδήποτε δείγμα μικρότερο από αυτό το ποσό θα απορριφθεί.Άλλοι λόγοι για την απόρριψη δείγματος περιελάμβαναν μαζική πήξη και/ή αιμόλυση και αποτυχία συλλογής παχύρρευστου πλάσματος για ανάλυση (Συμπληρωματικό Σχ. 5).Συνολικά 299 δείγματα τριχοειδούς αίματος ήταν διαθέσιμα για την αξιολόγηση των αποκρίσεων αντισωμάτων, από τα οποία 270 δείγματα ήταν επίσης διαθέσιμα για την αξιολόγηση των αποκρίσεων των Τ κυττάρων.
Οι ειδικές αποκρίσεις Τ-λεμφοκυττάρων SARS-CoV-2 αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία ανοσο-Τ COVID-19 (ImmunoServ Ltd) και πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως14.Εν συντομία, ένα φλεβικό vacutainer 6 ml ή 10 ml νατριούχου ηπαρίνης (BD) ελήφθη από κάθε συμμετέχοντα και υποβλήθηκε σε επεξεργασία στο εργαστήριο εντός 12 ωρών από τη συλλογή αίματος.Αν και τα περισσότερα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία εντός 24 ωρών, συλλέχθηκε ένα τριχοειδές αίμα 400–600 μl ηπαρινισμένου μικροαιμορραγικού αίματος (BD) εντός 48 ωρών από τη δειγματοληψία με το δάχτυλο.Δείγματα φλεβικού ή/και τριχοειδούς αίματος διεγέρθηκαν με χωριστές δεξαμενές πεπτιδίων ειδικά για SARS-CoV-2 (παραλλαγή άγριου τύπου) όπως περιγράφηκε προηγουμένως14.Αυτή η βιβλιοθήκη πεπτιδίων περιέχει 420 αλληλουχίες 15-μερών με 11 επικαλυπτόμενα αμινοξέα που καλύπτουν ολόκληρη την πρωτεΐνη ακίδας (S1 και S2) (S; πρωτεΐνη NCBI: QHD43416 1), φωσφοπρωτεΐνη νουκλεοκαψιδίου (NP; πρωτεΐνη NCBI: QHD43423 μεμβράνη προγλυκοΜ και 2) Πρωτεΐνη NCBI: QHD43419 1) κωδικοποιητικές αλληλουχίες (αναφέρονται ως "συνδυαστική βιβλιοθήκη πεπτιδίων S-/NP-/M").Όλα τα πεπτίδια καθαρίστηκαν σε >70%, διαλύθηκαν σε στείρο νερό και χρησιμοποιήθηκαν σε τελική συγκέντρωση 0,5 μg/ml ανά πεπτίδιο.Τα δείγματα επωάστηκαν στους 37°C για 20-24 ώρες.Οι σωλήνες στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν στα 5000xg για 3 λεπτά και συλλέχθηκαν ~150 μl πλάσματος από την κορυφή κάθε δείγματος αίματος.Αποθηκεύστε τα δείγματα πλάσματος στους -20°C για έως και ένα μήνα πριν εκτελέσετε δοκιμές ανίχνευσης κυτοκίνης/αντισώματος.
Η IFN-γ μετρήθηκε χρησιμοποιώντας το σετ IFN-γ ELISA MAX Deluxe (BioLegend, αριθμός καταλόγου 430116) και εκτελέστηκε σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.Αμέσως μετά την προσθήκη του διαλύματος διακοπής (2Ν H2SO4), η μικροπλάκα διαβάστηκε στα 450 nm χρησιμοποιώντας συσκευή ανάγνωσης πλακών ELISA BioLegend Mini.Η IFN-γ ποσοτικοποιήθηκε με παρέκταση τυπικής καμπύλης χρησιμοποιώντας GraphPad Prism.Οι τιμές κάτω από το κατώτερο όριο ανίχνευσης της ανάλυσης καταγράφηκαν ως 7,8 pg/ml, οι τιμές πάνω από το ανώτερο όριο ανίχνευσης της ανάλυσης καταγράφηκαν ως 1000 pg/ml.
Τα αντισώματα Anti-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα πάνελ 4 plex Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 (Bio-Rad, αρ. κατ. 12014634) και επισημάνθηκαν σύμφωνα με οδηγίες του κατασκευαστή.οδηγίες .Οι τιμές αναφοράς δειγμάτων πάνω από το όριο ποσοτικοποίησης αναλύθηκαν εκ νέου σε αραίωση 1:1000.Η μέση ένταση φθορισμού των σφαιριδίων μετρήθηκε σε ένα όργανο Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Οι συγκεντρώσεις αντισωμάτων υπολογίστηκαν με τη δοκιμασία απλού ελέγχου VIROTROL SARS-CoV-2 (Bio-Rad) και μετατράπηκαν σε WHO/NIBSC 20/136 International Reference Standard Units (BAU/mL) χρησιμοποιώντας τον παράγοντα βαθμονόμησης του κατασκευαστή.
Τα εξουδετερωτικά αντισώματα ειδικά για την υπομονάδα RBD και S1 κατά των γραμμών SARS-CoV-2 άγριου τύπου και δέλτα (B.1.617) SARS-CoV-2 μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας το κιτ αντισωμάτων εξουδετέρωσης παραλλαγής ανθρώπινου SARS-CoV-2 Bio-Plex Pro (Bio -Rad , αρ. εξαρτήματος 12016897), σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή.Μετρήστε τη μέση ένταση φθορισμού στο Bio-Plex 200 (Bio-Rad) και υπολογίστε το ποσοστό αναστολής (δηλαδή εξουδετέρωση) χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο:
Οι αναλύσεις λοιμώδους εξουδετέρωσης για τον SARS-CoV-2 πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως28.Εν συντομία, 600 PFU άγριου τύπου SARS-CoV-2 επωάστηκαν με 3 φορές σειριακές αραιώσεις πλάσματος εις διπλούν για 1 ώρα στους 37°C.Το μίγμα στη συνέχεια προστέθηκε σε κύτταρα VeroE6 για 48 ώρες.Οι μονοστοιβάδες σταθεροποιήθηκαν με 4% παραφορμαλδεΰδη, διαπερατήθηκαν με 0,5% NP-40 και επωάστηκαν για 1 ώρα σε ρυθμιστικό διάλυμα αποκλεισμού (PBS που περιείχε 0,1% tween και 3% αποβουτυρωμένο γάλα).Πρωτεύον αντίσωμα (αντι-νουκλεοκαψίδιο 1C7, Stratech) προστέθηκε σε ρυθμιστικό αποκλεισμού για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου.Μετά την πλύση, ένα δευτερεύον αντίσωμα (αντι-ποντικού IgG-HRP, Pierce) προστέθηκε σε ρυθμιστικό αποκλεισμού για 1 ώρα.Οι μονοστοιβάδες πλύθηκαν, αναπτύχθηκαν χρησιμοποιώντας Sigmafast OPD και διαβάστηκαν σε συσκευή ανάγνωσης πλακών Clariostar Omega.Φρεάτια χωρίς ιό, χωρίς ιό αλλά χωρίς αντισώματα, και κανονικοποιημένοι οροί που έδειχναν ενδιάμεση δραστηριότητα συμπεριλήφθηκαν σε κάθε πείραμα ως μάρτυρες.
Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε στο GraphPad Prism (έκδοση 9.4.1).Η κανονικότητα του συνόλου δεδομένων δοκιμάστηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Shapiro-Wilk.Για όλες τις συγκρίσεις χρησιμοποιήθηκαν μη παραμετρικά κριτήρια.Το τεστ Mann-Whitney χρησιμοποιήθηκε για μη ζευγαρωμένα δείγματα.Όλες οι δοκιμές ήταν διπλής όψης με όριο ονομαστικής σημασίας P ≤ 0,05.
Η αρχική διερευνητική ανάλυση του συνόλου δεδομένων έγινε σε R (έκδοση 4.0.3).Αυτό περιλαμβάνει την ανάπτυξη του πίνακα συσχέτισης μονομεταβλητής κατάταξης του Spearman, όπου η συσχέτιση μεταξύ δύο μεταβλητών αντιπροσωπεύεται από το μέγεθος και το χρώμα των τετραγώνων.Η στατιστική σημασία μεταξύ των συσχετίσεων υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας το Spearman's rho, όπου οι τιμές ≤0,05 θεωρήθηκαν σημαντικές.Οι συγκρίσεις που δεν ήταν στατιστικά σημαντικές εξαιρέθηκαν από τη μήτρα και σημειώθηκαν με κενά κελιά.Οι τιμές P προσαρμόστηκαν για πολλαπλές συγκρίσεις χρησιμοποιώντας τη διόρθωση του Holm.Χρησιμοποιήθηκε ένα δυαδικό μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης για την προσομοίωση της επίδρασης των μεταβλητών στο σύνολο δεδομένων στη θετική απόκριση στον COVID-19.Οι αποκρίσεις των κυττάρων Τ IFN-γ και οι βαθμολογίες τίτλου IgG αντι-RBD/S1/S2/N μετατράπηκαν σε παράγοντες, όπου κάθε άτομο κατατάχθηκε στο κατάλληλο τεταρτημόριο για κάθε βαθμολογία.Μετά από αυτό, αναπτύχθηκε ένα αρχικό μοντέλο έρευνας χρησιμοποιώντας τη συνάρτηση glm στο στατιστικό πακέτο (V4.0.3).Οι λόγοι πιθανοτήτων που προέρχονται από αυτό το αρχικό μοντέλο εξήχθησαν από τους συντελεστές του μοντέλου χρησιμοποιώντας τη συνάρτηση 'odds_plot' στο πακέτο OddsPlotty (V1.0.2).Κατά την ανάπτυξη του μοντέλου διασταυρούμενης επικύρωσης, χρησιμοποιήσαμε τη συνάρτηση «bestglm» από το πακέτο bestglm (V0.37.3) για να περιορίσουμε την προκατάληψη χρήστη και να διασφαλίσουμε ότι μπορεί να επιλεγεί το καλύτερο υποσύνολο προγνωστικών.Η μέθοδος που επιλέχθηκε ήταν «εξαντλητική» και το κριτήριο πληροφοριών που χρησιμοποιήθηκε για την αξιολόγηση της προσαρμογής του μοντέλου ήταν το AIC.Η ίδια ροή εργασίας που περιγράφεται παραπάνω χρησιμοποιήθηκε για να ληφθεί ο λόγος πιθανοτήτων.
Για περισσότερες πληροφορίες σχετικά με το σχεδιασμό της μελέτης, ανατρέξτε στην περίληψη της μελέτης Nature που συνδέεται με αυτό το άρθρο.
Επιστολές και αιτήματα για υλικά θα πρέπει να απευθύνονται στον Δρ Μάρτιν Σκαρ ή στον Καθηγητή Άντριου Γκόντκιν.Αυτό το άρθρο παρέχει τα αρχικά δεδομένα.
Ο κωδικός R που χρησιμοποιείται για τη δημιουργία στατιστικών μοντέλων είναι δημόσια διαθέσιμος χωρίς αίτημα29.Μπορείτε να βρείτε πληροφορίες και άδειες επανεκτύπωσης στη διεύθυνση www.nature.com/reprints.
Munro, APS et αϊ.Ασφάλεια και ανοσογονικότητα επτά εμβολίων COVID-19 ως τρίτη δόση (αναμνηστική) μετά από δύο δόσεις ChAdOx1 nCov-19 ή BNT162b2 (COV-BOOST) στο ΗΒ: φάση 2, τυφλή, πολυκεντρική, τυχαιοποιημένη, ελεγχόμενη δοκιμή.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV et al.Ανοσογονικότητα, ασφάλεια και αντιδραστικότητα του ετερόλογου πρωτογενούς εμβολιασμού κατά του COVID-19 (Com-COV2) χρησιμοποιώντας mRNA, ιικούς φορείς και ανοσοενισχυτικά πρωτεϊνικά εμβόλια στο Ηνωμένο Βασίλειο: φάση 2, μονή-τυφλή, τυχαιοποιημένη δοκιμή, τεστ μη κατωτερότητας.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB et αϊ.Αποτελεσματικότητα των εμβολίων COVID-19 σε ανοσοκατεσταλμένους ασθενείς: Συστηματική ανασκόπηση και μετα-ανάλυση.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Μειωμένη εξουδετέρωση της παραλλαγής B.1.1.529 micron SARS-CoV-2 από τον ορό μετά την ανοσοποίηση.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y και Baliser RD Λοίμωξη εκρηκτικά σε εμβολιασμένα με SARS-CoV-2 άτομα: μέτρηση, αιτίες και συνέπειες.Εθνικός Ιερέας Ανοσολογίας.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG et al.Εξασθενημένη ανοσολογική χυμική απόκριση στο εμβόλιο BNT162b2 Covid-19 για 6 μήνες.N. eng.J. Ιατρική.385, e84 (2021).
Carreño, JM et al.Δραστηριότητα ορών ανάρρωσης και εμβολίων κατά του SARS-CoV-2 Omicron.Nature 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, Η. et αϊ.Διάρκεια προστασίας του εμβολίου mRNA του Κατάρ έναντι των υποπαραλλαγών του SARS-CoV-2 Omicron BA.1 και BA.2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, ΜΖ et αϊ.Η συχνότητα των κυττάρων Β μνήμης μειώνεται με την πρωτοποριακή μόλυνση του εμβολίου δέλτα COVID-19.Μοριακή Ιατρική ΕΜΒΟ.14, e15227 (2022).
Kundu, R. et αϊ.Τα διασταυρούμενα αντιδραστικά Τ κύτταρα μνήμης σχετίζονται με την προστασία των επαφών COVID-19 από τη μόλυνση SARS-CoV-2.Εθνική κοινότητα.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH et al.Χαρακτηριστικές αποκρίσεις των Τ-λεμφοκυττάρων και των Β-λεμφοκυττάρων που αντιδρούν με μικρότερο SARS CoV-2 σε λήπτες εμβολίου COVID-19.η επιστήμη.Ανοσολογία.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Gao, Yu et al.Τα κληρονομικά Τ-λεμφοκύτταρα ειδικά για τον SARS-CoV-2 αναγνωρίζουν διασταυρούμενες παραλλαγές Omicron.Εθνική ιατρική.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ et al.Η μέτρηση των ειδικών για τον SARS-CoV-2 Τ-λεμφοκυττάρων από πλήρες αίμα αποκαλύπτει ασυμπτωματική μόλυνση και ανοσογονικότητα του εμβολίου σε υγιή άτομα και ασθενείς με καρκίνο συμπαγών οργάνων Ανοσολογία https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Tan, ΑΤ et αϊ.Ταχεία μέτρηση των αιχμηρών Τ κυττάρων SARS-CoV-2 σε ολικό αίμα εμβολιασμένων και φυσικά μολυσμένων ατόμων.J. Clinical.επενδύω.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU et al.Απόκριση εμβολίου COVID-19 σε ασθενείς με σκλήρυνση κατά πλάκας.εγκαθιστώ.Νευρώνες.91, 89–100 (2022).
Οι Bradley RE et al.Η επίμονη λοίμωξη COVID-19 με σύνδρομο Wiskott-Aldrich εξαφανίστηκε μετά από θεραπευτικό εμβολιασμό: αναφορά περιστατικού.J. Clinical.Ανοσολογία.42, 32–35 (2022).